體外轉錄獲得的mRNA未經細胞內一系列修飾，不具備Cap 結構與PolyA 尾，容易降解，易激活免疫反應，不能與核糖體起始蛋白結合，沒辦法啟動蛋白翻譯，因而在工業化mRNA生產中，需使用牛痘病毒加帽酶對IVT 的mRNA進行加帽修飾，使mRNA的5' 端獲得Cap0 結構，進一步使用2'-O- 甲基轉移酶將Cap0 轉化為Cap1。酶法加帽引入的帽結構與真核生物體內自然帽結構一致，從根本上降低外源mRNA 免疫原性的同時，保護其不被降解，并提高翻譯效率，增加細胞內蛋白產量。通過酶法加帽可獲得完整的加帽效率，而通過化學合成帽類似物結構加帽，其加帽效率相對較低，并且帽類似物結構與自然帽結構有差異。

mRNA Cap 2′-O-Methyltransferas 可利用 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作為甲基供體， 在 RNA 5′末端緊鄰帽結構（Cap 0）的鄰近的核苷酸的 2′-O 上添加甲基基團，形成帶有 Cap 1 結構的 mRNA。Cap1 結構能增強 mRNA 的翻譯效率，從而可提高轉染后 mRNA 編碼的蛋白表達水平。該酶只能以帶 7-甲基鳥苷帽結構（m7GpppN）的 RNA 為底物，不會作用于 5′末端為pN、ppN、 pppN 或 GpppN 的 RNA。帶 7-甲基鳥苷帽結構（m7GpppN）的 RNA 可通過 Vaccinia Capping System來制備。 

Cap0 結構的 mRNA 2′-O 甲基化（Cap1），以提高 mRNA 的翻譯和表達效率。