【基本信息用途】

本產(chǎn)品是使用Seebio?  Reverse Transcriptase，以總RNA或m RNA為模板合成1st Strand cDNA的試劑盒，含有所需的全部試劑。Seebio?  Reverse Transcriptase，是一種大腸桿菌重組表達(dá)的改進(jìn)型鼠白血病逆轉(zhuǎn)錄酶，具有高溫反應(yīng)、優(yōu)越的持續(xù)合成能力和強(qiáng)的雜質(zhì)耐受能力，逆轉(zhuǎn)錄溫度可提高至50~55℃，避免RNA復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)cDNA合成的抑制。可提供更高的全長(zhǎng)cDNA產(chǎn)量。合成的1st Strand cDNA可廣泛應(yīng)用于第二鏈合成、雜交、PCR、qPCR 反應(yīng)等。

【試劑盒組成】

【特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)】

(1)逆轉(zhuǎn)錄效率高、產(chǎn)量?jī)?yōu)異：Seebio? Reverse Transcriptase缺失了RNA酶H活性，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性，具有更好的逆轉(zhuǎn)錄效率，可提供較普通逆轉(zhuǎn)錄酶更高的全長(zhǎng)cDNA產(chǎn)量；
(2)耐熱性及穩(wěn)定性強(qiáng)：逆轉(zhuǎn)錄酶耐受高溫的能力是cDNA合成的重要影響因素，Seebio? Reverse Transcriptase在50-55℃下具有更高的熱穩(wěn)定性和更長(zhǎng)的半衰期；
(3)雜質(zhì)耐受度強(qiáng)：對(duì)常見雜質(zhì)（乙醇、異丙醇、水平衡酚、異硫氰酸胍、腐殖酸）均具有強(qiáng)的耐受度。

【用途】

以mRNA或者總RNA為模板，合成第一鏈cDNA：

1、RNA的逆轉(zhuǎn)錄，cDNA的克隆、基因表達(dá)

2、設(shè)備制造商配套檢測(cè)用試劑，如數(shù)字PCR儀、熒光定量PCR儀

【使用建議】

1.需準(zhǔn)備的主要試劑和儀器
恒溫水浴鍋、瓊脂糖凝膠、電泳儀、離心機(jī)、移液器和槍頭等。注意操作過程應(yīng)RNase-Free。

2.1st strand cDNA 合成反應(yīng)
(1)按下表配制反應(yīng)液

(2)緩慢混勻后，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：30℃10 min， 50℃30-60 min。

(3)反應(yīng)結(jié)束后，95℃保溫5 min使酶失活，-20℃保存。長(zhǎng)片段cDNA合成時(shí)，70℃ 15 min失活處理可保障片段有更好的完整性。