ssDNA/RNA環化連接酶

  • 別名：ssDNA/RNA 環化連接酶,CircLigase
  • 編碼：ECE1187A
  • 級別：
  • 簡介：ssDNA/RNA 環化連接酶，也稱為 CircLigase,通常是通過基因工程技術在特定的宿主細胞中表達生產得到的重組酶。
品牌 貨號 包裝規格 庫存 價格 數量
Seebio ECE1187A-2000U 2000U 有 1,286 元
- +
試用申請 大包裝定制

基礎信息

中文名ssDNA/RNA環化連接酶

產品介紹

基本信息

名稱：ssDNA/RNA 環化連接酶，也稱為 CircLigase。
來源：通常是通過基因工程技術在特定的宿主細胞中表達生產得到的重組酶。
規格：常見的有 2000U、20KU 等不同規格。

酶的特性

熱穩定性：為熱穩定的 DNA/RNA 連接酶，能在較高溫度下保持活性。
作用方式：不依賴于 ATP，可催化單鏈 DNA 或單鏈 RNA 的分子內環化。但澤葉生物的產品可催化分子間連接，對單鏈 DNA 的連接效率更高。
底物要求：要求催化底物單鏈 DNA/RNA 具有 5’- 磷酸基團和 3’-OH 基團。對于大于 15nt 的單鏈底物，能高效連接。
活性定義：65°C 1h 條件下，催化 1pmol 5’- 磷酸化的 ssDNA 底物環化，所需的酶量定義為 1Unit

反應條件

反應液配制：通常包含 CircLigase、5’磷酸化 ssDNA/RNA、10×CircLigase Buffer 以及適量的 ddH?O。上海撫生實業的產品還提到有時需加入 50mM MnCl?。
反應溫度和時間：一般為 65°C 孵育 1h 進行環化反應。
終止反應：反應結束后，可加入終濃度 10mM EDTA 終止反應，也可采用加熱方式 85℃ 10min 加熱失活。

使用注意事項

環化底物 ssDNA 或 RNA 必須帶有 5’磷酸基團，3’端含有 OH。
環化體系中的 ATP 濃度高于 20μM 以上時會極大抑制環化效率，甚至導致環化失敗，建議底物為純化產物。
由于酶具有耐熱性，在 65℃條件下進行連接反應，測試中 Betain 無益于連接效率提升（澤葉生物的產品對于含有二級或復雜結構的連接底物，可加入 0.4 - 0.8M Betain 以提高連接效率）。
該酶主要進行分子內環化連接（澤葉生物的產品可催化分子間連接），分子間的連接通常未檢測到。
酶對 ssDNA 和 RNA 的環化效率高，多數情況下，90% 以上的底物被環化。未被環化的 ssDNA 可通過加入 5U 的 Exonuclease I，37°C 消化 15min 去除，以獲得高純度的環化 ssDNA。
酶可以連接 15nt 以上的核苷酸，更長的產物連接參數可能需要進一步測試。
在小體系實驗時注意體系的蒸發，可加入礦物油以防止蒸發。

質量指標

MSDS

相關資料

  • clicks:9