【產(chǎn)品描述】

PEI是一種高電荷陽(yáng)離子聚合物，易結(jié)合負(fù)電荷的核酸分子形成復(fù)合物，由此介導(dǎo)核酸進(jìn)入細(xì)胞中。PEI用于核酸轉(zhuǎn)染具有高效、成本低、穩(wěn)定等特點(diǎn)，適用于HEK293、CHO等多種細(xì)胞系的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。本產(chǎn)品分子量為40,000Da，外觀為白色至灰白色固體。

【儲(chǔ)存條件】

4℃保存，有效期兩年。

【使用方法】

l  溶解配制

1.將10mg PEI粉末加入8ml超純化水中，用2N鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.1，72℃攪拌溶解（約5min）；

2.用2N氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為7.0±0.1，加水定容至10ml；

3.用0.1~0.2um無菌過濾器過濾除菌，即得到1mg/ml的儲(chǔ)存液；

4.分裝并儲(chǔ)存在4℃，3個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定；-20℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存，有效期1年，避免反復(fù)凍融。

l  細(xì)胞轉(zhuǎn)染

1.轉(zhuǎn)染前一天鋪板細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度到70%-80%為宜，并更換成新鮮的完全培養(yǎng)液；

2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：用不含血清的培養(yǎng)基稀釋DNA至濃度為20ng/ul，取適量PEI加入DNA溶液中（建議DNA和PEI的質(zhì)量比控制在1:1~1:3），室溫孵育15-30min，形成DNA-PEI復(fù)合物。

3.直接將DNA-PEI復(fù)合物加入細(xì)胞中，輕輕混勻，繼續(xù)培養(yǎng)4h-6h后更換含血清的培養(yǎng)基。

4.對(duì)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，通常在轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)后檢測(cè)產(chǎn)物表達(dá)；對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，12-24小時(shí)后傳代并進(jìn)一步通過篩選培養(yǎng)基培培養(yǎng)獲得穩(wěn)定整合的細(xì)胞克隆。

【參考用量】

針對(duì)不同培養(yǎng)皿，您可以參考下表制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物，但最佳轉(zhuǎn)染條件往往需要更多比例的測(cè)試。

實(shí)例 利用Seebio? 線性聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染CHO-K1

? 細(xì)胞類型：CHO-K1

? 轉(zhuǎn)染時(shí)間：48h

? DNA：eGFP/RFP雙表達(dá)質(zhì)粒

? DNA/PEI=1：2

【注意事項(xiàng)】

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究用，不得用于食品或藥品。請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并穿戴一次性手套操作。